(Flow cytometry, FCM) huwa analizzatur taċ-ċelluli li jkejjel l-intensità tal-fluworexxenza tal-markaturi taċ-ċelluli mtebbgħin. Hija teknoloġija ta 'teknoloġija għolja żviluppata bbażata fuq l-analiżi u l-issortjar ta' ċelloli singoli. Jista 'jkejjel u jikklassifika malajr id-daqs, l-istruttura interna, DNA, RNA, proteini, antiġeni u proprjetajiet fiżiċi jew kimiċi oħra taċ-ċelloli, u jista' jkun ibbażat fuq il-ġbir ta 'dawn il-klassifikazzjonijiet.
Iċ-ċitometru tal-fluss jikkonsisti prinċipalment fil-ħames partijiet li ġejjin:
1 Kamra tal-fluss u sistema fluwidika
2 Sors tad-dawl tal-lejżer u sistema ta 'formazzjoni tar-raġġ
3 Sistema ottika
4 Elettronika, ħażna, wiri u sistema ta 'analiżi
5 Sistema ta 'għażla taċ-ċelluli
Fost dawn, l-eċitazzjoni tal-lejżer fis-sors tad-dawl tal-lejżer u s-sistema li tifforma r-raġġ hija l-kejl ewlieni tas-sinjali tal-fluworexxenza fiċ-ċitometrija tal-fluss. L-intensità tad-dawl ta 'eċitazzjoni u l-ħin ta' espożizzjoni huma relatati mal-intensità tas-sinjal tal-fluworexxenza. Il-lejżer huwa sors ta 'dawl koerenti li jista' jipprovdi illuminazzjoni ta 'wavelength wieħed, ta' intensità għolja u ta 'stabbiltà għolja. Huwa s-sors tad-dawl ta 'eċitazzjoni ideali biex jissodisfa dawn ir-rekwiżiti.
Hemm żewġ lentijiet ċilindriċi bejn is-sors tal-lejżer u l-kamra tal-fluss. Dawn il-lentijiet jiffokaw raġġ tal-lejżer b'sezzjoni trasversali ċirkolari emessa mis-sors tal-lejżer f'raġġ ellittiku b'sezzjoni trasversali iżgħar (22 μm × 66 μm). L-enerġija tal-lejżer fi ħdan dan ir-raġġ ellittiku hija mqassma skond distribuzzjoni normali, li tiżgura intensità ta 'illuminazzjoni konsistenti għaċ-ċelloli li jgħaddu miż-żona ta' skoperta tal-lejżer. Min-naħa l-oħra, is-sistema ottika tikkonsisti minn settijiet multipli ta 'lentijiet, pinholes, u filtri, li jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor f'żewġ gruppi: upstream u downstream tal-kamra tal-fluss.
Is-sistema ottika quddiem il-kamra tal-fluss tikkonsisti minn lenti u pinhole. Il-funzjoni ewlenija tal-lenti u pinhole (ġeneralment żewġ lentijiet u pinhole) hija li tiffoka r-raġġ tal-lejżer b'sezzjoni trasversali ċirkolari emessa mis-sors tal-lejżer f'raġġ ellittiku b'sezzjoni trasversali iżgħar. Dan iqassam l-enerġija tal-lejżer skont distribuzzjoni normali, li jiżgura intensità ta 'illuminazzjoni konsistenti għaċ-ċelloli madwar iż-żona ta' skoperta tal-lejżer u jimminimizza l-interferenza minn dawl mitluf.
Hemm tliet tipi ewlenin ta 'filtri:
1: Filtru li jgħaddi fit-tul (LPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl b'wavelengths ogħla minn valur speċifiku.
2: Filtru ta 'pass qasir (SPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl b'wavelengths taħt valur speċifiku.
3: Filtru tal-Bandpass (BPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl f'medda speċifika ta 'wavelength.
Kombinazzjonijiet differenti ta 'filtri jistgħu jidderieġu sinjali ta' fluworexxenza f'tul ta 'mewġ differenti għal tubi fotomultiplikaturi individwali (PMTs). Pereżempju, filtri għall-iskoperta tal-fluworexxenza ħadra (FITC) quddiem PMT huma LPF550 u BPF525. Il-filtri użati biex jiskopru fluworexxenza oranġjo-aħmar (PE) quddiem il-PMT huma LPF600 u BPF575. Il-filtri għall-iskoperta tal-fluworexxenza ħamra (CY5) quddiem il-PMT huma LPF650 u BPF675.
Iċ-ċitometrija tal-fluss tintuża prinċipalment għall-għażla taċ-ċelluli. Bl-avvanz tat-teknoloġija tal-kompjuter, l-iżvilupp tal-immunoloġija u l-invenzjoni tat-teknoloġija tal-antikorpi monoklonali, l-applikazzjonijiet tagħha fil-bijoloġija, mediċina, farmaċija u oqsma oħra qed isiru dejjem aktar mifruxa. Dawn l-applikazzjonijiet jinkludu analiżi tad-dinamika taċ-ċelluli, apoptożi taċ-ċelluli, ittajpjar taċ-ċelluli, dijanjosi tat-tumur, analiżi tal-effikaċja tad-droga, eċċ.
Ħin tal-post: 21-Settembru 2023
