(Ċitometrija tal-fluss, FCM) hija analizzatur taċ-ċelloli li jkejjel l-intensità tal-fluworexxenza ta' markaturi taċ-ċelloli mtebbgħin. Hija teknoloġija ta' teknoloġija għolja żviluppata bbażata fuq l-analiżi u l-issortjar ta' ċelloli singoli. Tista' tkejjel u tikklassifika malajr id-daqs, l-istruttura interna, id-DNA, l-RNA, il-proteini, l-antiġeni u proprjetajiet fiżiċi jew kimiċi oħra taċ-ċelloli, u tista' tkun ibbażata fuq il-ġbir ta' dawn il-klassifikazzjonijiet.
Iċ-ċitometru tal-fluss jikkonsisti prinċipalment mill-ħames partijiet li ġejjin:
1 Kamra tal-fluss u sistema fluwidika
2 Sors tad-dawl bil-lejżer u sistema tal-iffurmar tar-raġġ
3 Sistema ottika
4 Elettronika, ħażna, wiri u sistema ta' analiżi
5 Sistema ta' klassifikazzjoni taċ-ċelloli
Fost dawn, l-eċitazzjoni bil-lejżer fis-sors tad-dawl tal-lejżer u s-sistema li tifforma r-raġġ hija l-kejl ewlieni tas-sinjali tal-fluworexxenza fiċ-ċitometrija tal-fluss. L-intensità tad-dawl tal-eċitazzjoni u l-ħin tal-espożizzjoni huma relatati mal-intensità tas-sinjal tal-fluworexxenza. Il-lejżer huwa sors ta' dawl koerenti li jista' jipprovdi illuminazzjoni b'tul ta' mewġa wieħed, intensità għolja, u stabbiltà għolja. Huwa s-sors tad-dawl tal-eċitazzjoni ideali biex jissodisfa dawn ir-rekwiżiti.
Hemm żewġ lentijiet ċilindriċi bejn is-sors tal-lejżer u l-kamra tal-fluss. Dawn il-lentijiet jiffokaw raġġ tal-lejżer b'sezzjoni trasversali ċirkolari emess mis-sors tal-lejżer f'raġġ ellittiku b'sezzjoni trasversali iżgħar (22 μm × 66 μm). L-enerġija tal-lejżer f'dan ir-raġġ ellittiku hija mqassma skont distribuzzjoni normali, li tiżgura intensità ta' illuminazzjoni konsistenti għaċ-ċelloli li jgħaddu miż-żona ta' skoperta tal-lejżer. Min-naħa l-oħra, is-sistema ottika tikkonsisti f'settijiet multipli ta' lentijiet, toqob żgħar, u filtri, li jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor f'żewġ gruppi: 'il fuq u 'l isfel mill-kamra tal-fluss.
Is-sistema ottika quddiem il-kamra tal-fluss tikkonsisti minn lenti u toqba żgħira. Il-funzjoni ewlenija tal-lenti u t-toqba żgħira (ġeneralment żewġ lentijiet u toqba żgħira) hija li tiffoka r-raġġ tal-lejżer b'sezzjoni trasversali ċirkolari emess mis-sors tal-lejżer f'raġġ ellittiku b'sezzjoni trasversali iżgħar. Dan jiddistribwixxi l-enerġija tal-lejżer skont distribuzzjoni normali, u jiżgura intensità ta' illuminazzjoni konsistenti għaċ-ċelloli madwar iż-żona ta' skoperta tal-lejżer u jimminimizza l-interferenza minn dawl mitluf.
Hemm tliet tipi ewlenin ta' filtri:
1: Filtru li jgħaddi 'l quddiem fit-tul (LPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl b'tul ta' mewġ ogħla minn valur speċifiku.
2: Filtru short-pass (SPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl b'tul ta' mewġ taħt valur speċifiku.
3: Filtru bandpass (BPF) - jippermetti biss li jgħaddi dawl f'medda speċifika ta' wavelength.
Kombinazzjonijiet differenti ta' filtri jistgħu jidderieġu sinjali ta' fluworexxenza f'tul ta' mewġ differenti lejn tubi fotomoltiplikaturi individwali (PMTs). Pereżempju, filtri għall-iskoperta ta' fluworexxenza ħadra (FITC) quddiem il-PMT huma LPF550 u BPF525. Il-filtri użati biex jiskopru fluworexxenza oranġjo-ħamra (PE) quddiem il-PMT huma LPF600 u BPF575. Il-filtri għall-iskoperta ta' fluworexxenza ħamra (CY5) quddiem il-PMT huma LPF650 u BPF675.
Iċ-ċitometrija tal-fluss tintuża l-aktar għall-issortjar taċ-ċelloli. Bl-avvanz tat-teknoloġija tal-kompjuter, l-iżvilupp tal-immunoloġija u l-invenzjoni tat-teknoloġija tal-antikorpi monoklonali, l-applikazzjonijiet tagħha fil-bijoloġija, il-mediċina, il-farmaċija u oqsma oħra qed isiru dejjem aktar mifruxa. Dawn l-applikazzjonijiet jinkludu l-analiżi tad-dinamika taċ-ċelloli, l-apoptożi taċ-ċelloli, it-tajpjar taċ-ċelloli, id-dijanjosi tat-tumur, l-analiżi tal-effikaċja tal-mediċini, eċċ.
Ħin tal-posta: 21 ta' Settembru 2023
